离心超滤管怎么清洗?超滤离心管使用时要注意什么?

2023-05-29 16:35:28来源:星空网

离心超滤管怎么清洗?1.将刻度拨盘刻度置于零位,分液管帽盖上管口。2.把整个瓶口分配器和试剂瓶放置在适...

离心超滤管怎么清洗?

1.将刻度拨盘刻度置于零位,分液管帽盖上管口。

2.把整个瓶口分配器和试剂瓶放置在适当大小的清洗容器内,再设置刻度拨盘至较大分液量的刻度。

3.从试剂瓶上旋转取下瓶口分配器(带上手套来操作)。

4.把取下的瓶口分配器的分液管置于试剂瓶口上,同时取下分液管帽向后滑动至固定位置。

5.上下移动活塞提手(确认安全阀箭头指向分液管),移出剩余溶液。

6.在清洗容器内放入合适的清洗溶液,把吸液管浸入其中,重复吸液排液多次。

7.用适当的溶液(如蒸馏水或丙酮)重复移液清洗多次后,取出并排出瓶口分配器中剩余溶液。

8.把吸液管,回液管和分液管从瓶口分配器上都取下来分别清洁干净。

超滤离心管使用时要注意什么?

(1)选择合适的超滤管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。

(2)新买来的超滤是干燥的,使用前加入超纯水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。

(3)平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。

(4)当浓缩到剩下1ml时,取50ul缓冲溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。

(5)前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再 浓缩至1ml左右,连续三次,最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。

关键词: 离心超滤管怎么清洗,超滤离心管使用时

责任编辑:hnmd004