离心超滤管怎么清洗?超滤离心管使用时要注意什么?

离心超滤管怎么清洗?

1.将刻度拨盘刻度置于零位，分液管帽盖上管口。

2.把整个瓶口分配器和试剂瓶放置在适当大小的清洗容器内，再设置刻度拨盘至较大分液量的刻度。

3.从试剂瓶上旋转取下瓶口分配器(带上手套来操作)。

4.把取下的瓶口分配器的分液管置于试剂瓶口上，同时取下分液管帽向后滑动至固定位置。

5.上下移动活塞提手(确认安全阀箭头指向分液管)，移出剩余溶液。

6.在清洗容器内放入合适的清洗溶液，把吸液管浸入其中，重复吸液排液多次。

7.用适当的溶液(如蒸馏水或丙酮)重复移液清洗多次后，取出并排出瓶口分配器中剩余溶液。

8.把吸液管，回液管和分液管从瓶口分配器上都取下来分别清洁干净。

超滤离心管使用时要注意什么?

(1)选择合适的超滤管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。

(2)新买来的超滤是干燥的，使用前加入超纯水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。

(3)平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。

(4)当浓缩到剩下1ml时，取50ul缓冲溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了，将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。

(5)前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤)，再 浓缩至1ml左右，连续三次，最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul，也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算，三次达到1000倍以上，基本上可以达到换buffer的目的。

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